科研-山羊O型口蹄疫抗體（FMD-Ab）定性檢測試劑盒

產(chǎn)品品牌：睿信生物 商品貨號：RX-AN2D754526

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說明書
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反應(yīng)種屬 山羊
檢測范圍 判定陰陽性
物理性能 試劑盒的各液體組分應(yīng)澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應(yīng)真空包裝，無破損漏氣。
用途 用于定性檢測血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中山羊O型口蹄疫抗體（FMD-Ab）。
實驗原理 試劑盒采用間接法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被山羊O型口蹄疫抗體（FMD-Ab）捕獲抗原的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、陰性和陽性對照，再加入HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的山羊O型口蹄疫抗體（FMD-Ab）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD值），判定陰陽性。
特異性 /
重復(fù)性 板內(nèi)變異系數(shù)小于15%。
回收率 /
試驗所需自備試驗器材 1、酶標(biāo)儀（450nm）
2、高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3、37℃恒溫箱
4、蒸餾水或去離子水
操作程序 1、從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。
2、設(shè)置陰性對照孔、陽性對照孔和樣本孔，陰性、陽性對照孔各加 50μL 對照品，樣本孔中加入待測樣本 50μL，空白孔不加。
3、除空白孔外，對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體 100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。
4、棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板 5 次（也可用洗板機(jī)洗板）。
5、每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。
6、每孔加入終止液 50μL，15min 內(nèi)，在 450nm 波長處測定各孔的 OD 值。
注意事項 1、嚴(yán)格按照規(guī)定的時間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫 20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
2、洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
3、消除板底殘留的液體和手指印，否則影響 OD 值。
4、底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。
5、避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。
6、在儲存和溫育時避免強(qiáng)光直接照射。
7、平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
8、任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白
問題分析 ①問題描述：標(biāo)準(zhǔn)曲線差
可能原因及相應(yīng)對策：
1.試劑盒平衡時間不夠——不低于 2 個小時的室溫平衡
2.吸取及洗滌不充分——充分的吸取及洗滌
3.移液不精確——檢查和校正移液器
②問題描述：精密度低
可能原因及相應(yīng)對策：
1.洗滌不充分——按說明書要求充分洗滌和浸泡
2.混勻不充分和吸取試劑不足——充分混勻和吸取試劑
3.重復(fù)利用吸頭、容器和覆膜——使用加樣器要更換新的吸頭、使用新的封板模
4.加樣不精確——檢查和校正移液器
③問題描述：O.D值低
可能原因及相應(yīng)對策：
1.每孔加的試劑量不精確——校正移液器，精確加入試劑
2.溫育時間不正確——保證充足的溫育時間
3.溫育溫度不正確——試劑要平衡至室溫并保證準(zhǔn)確的溫育溫度
4.酶標(biāo)記物或底物失效——通過混合酶標(biāo)記物和底物，顏色迅速顯現(xiàn)來檢查
5.沒有加入終止液——按照說明書實驗操作步驟加入終止液
6.超出讀數(shù)時間讀數(shù)——在說明書推薦的讀數(shù)時間內(nèi)讀數(shù)
④問題描述：樣本值
可能原因及相應(yīng)對策：
1.不正確的樣本儲存方式——正確儲存樣本，使用新鮮樣本進(jìn)行實驗
2.不正確的樣本收集和處理方法——采取正確的樣本收集和處理方法
3.待測物質(zhì)在樣本中含量低——使用新鮮樣本，重復(fù)實驗
聲明 該試劑盒僅供研究使用，如將其用于臨床診斷或任何其他用途，我公司將不對因此產(chǎn)生的問題負(fù)責(zé)，亦不承擔(dān)任何法律責(zé)任。

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