當(dāng)前位置：首頁(yè) > 一步法試劑盒 > 山羊ELISA試劑盒> 科研-山羊A型口蹄疫抗體（FMD-Ab）定性檢測(cè)試劑盒
| 反應(yīng)種屬 | 山羊 |
| 檢測(cè)范圍 | 判定陰陽(yáng)性 |
| 物理性能 | 試劑盒的各液體組分應(yīng)澄清透明、無(wú)沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應(yīng)真空包裝，無(wú)破損漏氣。 |
| 用途 | 用于定性檢測(cè)血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中山羊A型口蹄疫抗體（FMD-Ab）。 |
| 實(shí)驗(yàn)原理 | 試劑盒采用間接法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被山羊A型口蹄疫抗體（FMD-Ab）捕獲抗原的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、陰性和陽(yáng)性對(duì)照，再加入HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的山羊A型口蹄疫抗體（FMD-Ab）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），判定陰陽(yáng)性。 |
| 特異性 | / |
| 重復(fù)性 | 板內(nèi)變異系數(shù)小于15%。 |
| 回收率 | / |
| 試驗(yàn)所需自備試驗(yàn)器材 | 1、酶標(biāo)儀（450nm） 2、高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3、37℃恒溫箱 4、蒸餾水或去離子水 |
| 操作程序 | 1、從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。 2、設(shè)置陰性對(duì)照孔、陽(yáng)性對(duì)照孔和樣本孔，陰性、陽(yáng)性對(duì)照孔各加 50μL 對(duì)照品，樣本孔中加入待測(cè)樣本 50μL，空白孔不加。 3、除空白孔外，對(duì)照孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體 100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。 4、棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板 5 次（也可用洗板機(jī)洗板）。 5、每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。 6、每孔加入終止液 50μL，15min 內(nèi)，在 450nm 波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的 OD 值。 |
| 注意事項(xiàng) | 1、嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫 20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。 2、洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過(guò)程中不要讓微孔干燥掉。 3、消除板底殘留的液體和手指印，否則影響 OD 值。 4、底物顯色液應(yīng)呈無(wú)色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。 5、避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。 6、在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。 7、平衡至室溫后再打開(kāi)密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。 8、任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白 |
| 問(wèn)題分析 | ①問(wèn)題描述：標(biāo)準(zhǔn)曲線差 可能原因及相應(yīng)對(duì)策： 1.試劑盒平衡時(shí)間不夠——不低于 2 個(gè)小時(shí)的室溫平衡 2.吸取及洗滌不充分——充分的吸取及洗滌 3.移液不精確——檢查和校正移液器 ②問(wèn)題描述：精密度低 可能原因及相應(yīng)對(duì)策： 1.洗滌不充分——按說(shuō)明書(shū)要求充分洗滌和浸泡 2.混勻不充分和吸取試劑不足——充分混勻和吸取試劑 3.重復(fù)利用吸頭、容器和覆膜——使用加樣器要更換新的吸頭、使用新的封板模 4.加樣不精確——檢查和校正移液器 ③問(wèn)題描述：O.D值低 可能原因及相應(yīng)對(duì)策： 1.每孔加的試劑量不精確——校正移液器，精確加入試劑 2.溫育時(shí)間不正確——保證充足的溫育時(shí)間 3.溫育溫度不正確——試劑要平衡至室溫并保證準(zhǔn)確的溫育溫度 4.酶標(biāo)記物或底物失效——通過(guò)混合酶標(biāo)記物和底物，顏色迅速顯現(xiàn)來(lái)檢查 5.沒(méi)有加入終止液——按照說(shuō)明書(shū)實(shí)驗(yàn)操作步驟加入終止液 6.超出讀數(shù)時(shí)間讀數(shù)——在說(shuō)明書(shū)推薦的讀數(shù)時(shí)間內(nèi)讀數(shù) ④問(wèn)題描述：樣本值 可能原因及相應(yīng)對(duì)策： 1.不正確的樣本儲(chǔ)存方式——正確儲(chǔ)存樣本，使用新鮮樣本進(jìn)行實(shí)驗(yàn) 2.不正確的樣本收集和處理方法——采取正確的樣本收集和處理方法 3.待測(cè)物質(zhì)在樣本中含量低——使用新鮮樣本，重復(fù)實(shí)驗(yàn) |
| 聲明 | 該試劑盒僅供研究使用，如將其用于臨床診斷或任何其他用途，我公司將不對(duì)因此產(chǎn)生的問(wèn)題負(fù)責(zé)，亦不承擔(dān)任何法律責(zé)任。 |
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